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3R-Project 39-92

In vitro Isolation von pathogenen Trypanosomen aus Mensch, Haustier und Tsetsefliege

Brun R., , Kaminsky R.
Schweizerisches Tropeninstitut, Basel

Duration: 3 years End of the Project: 1995

Background and Aim
Die Isolation von Trypanosomen (pathogene Blutparasiten) aus dem Menschen oder aus erkrankten Haustieren ist wichtig für die Diagnose und nachfolgende Behandlung der Krankheit sowie zur Charakterisierung und dem Erkennen von Arzneimittel-Resistenzen. Als Alternative zur Vermehrung in Nagetieren soll ein Protokoll für eine in vitro Isolation der Parasiten erarbeitet werden.
Im Labor sollen zunächst die geeigneten Kultivationsbedingungen gefunden werden. Dann soll die Toxizität verschiedener Antibiotika und -myotika für Trypanosomen festgelegt und synergistische Wirkung untersucht werden mit dem Ziel, eine gegen Bakterien und Pilze wirksame Antibiotika-Mischung zu finden, die für die Trypanosomen jedoch untoxisch ist. Die Methode soll in Uganda unter Feldbedingungen erprobt und dort auch eingeführt werden.

Method and Results
Um Antibiotika oder Antimykotika optimal zur Verhinderung von mikrobieller Kontamination bei der Isolierung von Trypanosomen einsetzen zu können, wurde zuerst die Toxizität von Antibiotika auf die Parasiten bestimmt. Zwei Referenzstämme von Trypanosomen, STIB 345 (Trypanosoma brucei) und STIB 704 (Trypanosoma rhodesiense), 7 Antibiotika und 4 Antimykotika sowie zwei Inkubationszeiten (3 und 10 Tage) wurden ausgewählt. ... Es zeigt sich, dass drei Antibiotika (Chloramphenicol, Neomycin und Kanamycin) ausserordentlich gut verträglich sind. Von den Antimykotika ist lediglich Fluorcytosin bedenkenlos einsetzbar.
Zur Isolation von Trypanosomenstämmen werden normalerweise Labortiere eingesetzt. Durch ein effizientes Isolationsprotokoll mit optimal dosierten Antibiotika/ Antimykotika in Konzentrationen, die für die Parasiten unschädlich sind, können Labortiere weitgehend eingespart werden (Reduce). Von Replace zu sprechen, wäre noch verfrüht, da wir noch nicht wissen, wie empfindlich die Kulturisolation im Vergleich zur Isolation im Labortier wirklich ist.
Der Einsatz der beschriebenen Antibiotika/-mykotika Mischung wird zur Zeit in Uganda für die Isolation von Trypanosomen aus Patienten erprobt. Darüberhinaus hat sich die Methode bereits im Labor in Uganda und in der Schweiz für die Adaptation der Parasiten an in vitro Kulturen zu Charakterisierungszwecken bewährt. Die gewonnenen Erkenntnisse lassen sich auch für die Isolation anderer Parasiten anwenden, z.B. bei der Diagnose auf Leishmaniose mittels Kultur.

References
Mäser P. Grether-Bühler Y., Kaminsky R. and Brun R. (2002) An anti-contamination cocktail for the in vitro isolation and cultivation of parasitic protozoa. Parasit. Res. 88: 172-174.